上學的時候也裝過層析柱，由于技術不過關，裝出來的柱子里面經常有氣泡，實驗效果不好。柱子裝填的效果對柱效影響很大。如何使用色譜柱使實驗順利進行，這就需要對色譜柱做一下深入的了解了。

一般的液相色譜柱由柱管、柱頭螺母、死堵、篩板、還有里面的填料組成。不同品牌的構造略有不

柱的分類2液相色譜柱分類多樣主要有以下分類方式

按照固定相基質分：

無機氧化物（常用硅膠、氧化鋁）、聚合物基質（常用DVB、PS-DVB、PHAM等）和全石墨化碳色譜柱等。

按結構和形狀分：

全多孔硅膠柱和核殼柱，無定型和球形，整體柱。

按分離模式分：

正相、反相、離子交換、體積排阻、親和、手性等。

按照分離規(guī)模和色譜柱尺寸分：

制備柱、分析柱、微型柱、毛細管柱等。

色譜柱的類型和構型（粒徑、內徑、長度、碳載量、孔徑等）選擇通常有分離的目的決定，對特定類型的色譜柱，不同品牌不同系列之間差異很大。

表征色譜柱性能的參數(shù)主要有：理論塔板數(shù)、不對稱因子、對兩種不同溶質的選擇性、色譜柱的反壓、保留時間的重現(xiàn)性、鍵和相濃度、色譜柱的穩(wěn)定性等。一般色譜柱出廠COA報告包含其中比較關鍵的項目。

我們常見的色譜柱品牌有waters、安捷倫、賽默飛、島津、shodex、大賽璐、還有被大曹三耀收購的資生堂，國內品牌比較出名的就是月旭、依利特了。

我們再看看各種各樣的鍵和相都是啥

這么多的鍵和相到底應該怎么選，有沒有規(guī)律呢，必須有啊，往下瞅瞅~

又想起了化學老師那句萬能的箴言：“結構決定性質，性質決定用途。”結構和性質還決定了這伙計需要用什么柱子分離。

了解被分離物有何區(qū)別？有無可電離集團？電離常數(shù)？PH如何影響色譜分析？比如下圖ＰＨ對分離的影響。

常規(guī)的硅膠基質色譜柱不能耐受高PH，可以選擇雜化硅膠顆?；蛘呔酆衔锘|的色譜柱，多點鍵和的色譜柱在高PH下也會比單點鍵和的色譜柱壽命更長。下圖便是某位小姐姐家的色譜柱在高PH下硅膠溶解的圖片。

１、拿到色譜柱后先閱讀說明書，了解色譜柱的具體性能：耐受溫度、耐受ＰＨ等。以及色譜柱的沖洗和保存條件。經過柱校測試確認色譜柱本身沒有問題后方可正常使用。

２、樣品充分前處理，確保樣品的潔凈；使用保護柱或在線過濾器，根據(jù)實際情況更換保護柱芯或濾片。

３、避免壓力和溫度的急劇變化及任何機械震動。

４、應逐漸改變溶劑的組成，特別是反相色譜中如果流動相中使用了緩沖鹽，避免出現(xiàn)鹽析。

５、選擇使用適宜的流動相（尤其是PH），以避免固定相被破壞，PH過低共價鍵斷裂，鍵和相水解；PH過高硅膠溶解。

６、色譜柱使用過程中，如果壓力升高，或出現(xiàn)污染，選擇適當?shù)臈l件沖洗或反沖。

適用于C18、C8、C4、C1、苯基、PFP、AQ等

使用至少20倍柱體積的含有≥30%誰的極性郵寄溶劑（如乙腈）作為流動相除去柱子中的緩沖鹽；使用至少20倍柱體積的含有95%極性郵寄溶劑（如乙腈）沖洗色譜柱。

污染物的去除常規(guī)星期后柱校沒有明顯恢復時，使用50%異丙醇／乙腈以低流速清洗20倍柱體積以除去污染物。（以上操作可根據(jù)實驗室自身SOP視情況而定，此方法僅為賽默飛針對自己品牌的反相色譜柱沖洗的參考意見）

適用于氨基柱、氰基柱

常規(guī)清洗：乙腈：水＝60:40條件對色譜柱進行沖洗，清洗時不建議水相比例超過40%，過高使用水相容易導致鍵和相水解。

色譜柱再生：當色譜柱經過長期使用，柱校降低時，可以對色譜柱進行再生，乙腈：水（水中加入0.05%氨水）＝60:40條件沖洗30倍柱體積。（以上操作可根據(jù)實驗室自身SOP視情況而定，此方法僅為賽默飛針對自己品牌的色譜柱沖洗的參考意見）

適用于離子交換柱SCX、SAX沖洗方法

日常沖洗：用100%水沖洗30個柱體積除鹽，然后用20%甲醇或乙腈沖洗20個柱體積后保存在20%甲醇或乙腈中。

長期保存：用100%水沖洗30個柱體積去除鹽，然后用50%乙腈；50%水沖洗20個柱體積后保存在50%乙腈：50%水中。

再生：先用高濃度的緩沖鹽（不超過１Ｍ），然后再用100%水洗，100%乙腈或甲醇沖洗，再用20%乙腈或甲醇保存。（以上操作可根據(jù)實驗室自身SOP視情況而定，此方法僅為賽默飛針對自己品牌的色譜柱沖洗的參考意見）